離心式快速脫鹽柱(5 kD)

● 產(chǎn)品介紹

離心式快速脫鹽柱根據(jù)排阻層析原理可以出色地完成蛋白脫鹽或緩沖液置換，適用于高于5 kD蛋白樣品的脫鹽、緩沖液置換或小分子去除。該產(chǎn)品回收率高，幾乎等體積回收蛋白樣品，在脫鹽的同時(shí)保持高回收率，樣品不會(huì)被稀釋。簡(jiǎn)單使用離心操作，無(wú)需裝柱，代替比較耗時(shí)的傳統(tǒng)透析處理，以達(dá)到快速蛋白樣品脫鹽純化以及替換蛋白質(zhì)緩沖液的目的。

脫鹽柱參數(shù)如下：

● 貯存、運(yùn)輸和效期：

常溫貯存（不能冷凍）；常溫運(yùn)輸；有效期兩年。

● 注意事項(xiàng)：

1. 操作方便，免去了繁瑣的透析過(guò)程，15-20分鐘內(nèi)即可完成樣品處理。

2. 本脫鹽柱建議一次性使用，不建議重復(fù)使用。

● 操作步驟

1. 取脫鹽柱，放入2 ml收集管中。  

2. 加入400 μl滅菌水或樣品所需的緩沖液，常溫靜置5 min，1000×g（約3000 rpm）離心2 min。

注：離心力不要高于1000 g，過(guò)高的離心力會(huì)損傷填料，降低脫鹽效率。

3. 重復(fù)步驟2操作2次。

4. 樣品準(zhǔn)備：

樣品在上樣前建議離心取上清或用0.22 μm或0.45 μm濾膜過(guò)濾，減少雜質(zhì)影響。

5. 脫鹽處理：

脫鹽柱轉(zhuǎn)移到新的1.5 ml離心管中，脫鹽柱中加入100-200 μl需要處理的蛋白樣品，靜置30秒，1000×g（約3000 rpm）離心2 min，收集回收樣品，保存?zhèn)溆谩?

注：為了確保從小體積樣品中獲得最大的蛋白回收效率，低于100 μl樣品上樣后要在樣品完全吸收后向填料中加入適當(dāng)體積的超純水或緩沖液壓層，使得總上樣體積為100 μl。

● 注意事項(xiàng)

1. 回收效果：樣品脫鹽后的回收率與樣品的濃度，以及上樣體積相關(guān)。樣品濃度越高，其回收率越高；同時(shí)在推薦的樣品上樣量范圍內(nèi)，上樣量越大，其回收率也會(huì)隨之升高。通常脫鹽后蛋白的回收率在70-90%。

2. 樣品處理體積要在柱子處理范圍內(nèi)，該脫鹽柱最多處理體積是200 μl樣品，過(guò)多會(huì)導(dǎo)致收集 

管中液體浸沒(méi)到脫鹽柱。

3. 填料在高濃度醇溶液或飽和鹽溶液中會(huì)有失水收縮現(xiàn)象，請(qǐng)勿將上述溶液進(jìn)行過(guò)柱；

4. 加樣時(shí)盡量均勻加至管中心位置；

5. 當(dāng)樣品濃度過(guò)低時(shí)（<0.01 mg/ml)，需先將樣品濃縮到所需體積或所需濃度。

● 常見(jiàn)問(wèn)題

 實(shí)驗(yàn)示例：

          離心式快速脫鹽柱脫鹽處理樣品
樣品1（lane1-5）：細(xì)菌裂解物（正常鹽濃度）
lane1，2，3：細(xì)菌裂解物上樣5μl，4μl，3μl；
lane4，5：100μl細(xì)菌裂解物經(jīng)過(guò)脫鹽柱處理后，上樣5μl
lane 4：S公司脫鹽柱；lane 5：Real-Times脫鹽柱
結(jié)論：脫鹽柱對(duì)裂解物所有蛋白都有較好的回收率（80%）

樣品2（lane 6-8）：BSA溶液
lane 6: BSA水溶液（0.4μg/μl）上樣量5μl（2μg）
lane 7：BSA 0.5M NaCl溶液（0.4μg/μl）上樣量5μl（2μg） 
lane 8：BSA 0.5M NaCl溶液脫鹽柱處理上樣量5μl
結(jié)論：脫鹽柱脫鹽處理效果明顯（含鹽BSA電泳泳道明顯變寬）
           脫鹽后的BSA回收率可達(dá)90%

脫鹽程序：脫鹽柱中加入400μl超純水，常溫靜置5min，1000 g
離心3min，重復(fù)2次；脫鹽柱放入新的1.5ml離心管中，加入0.1ml
細(xì)菌裂解物或0.2ml BSA溶液，靜置30S，1000g離心3min。

電泳：4-18% RealPAGE預(yù)制膠，1×TGS，200V 37-13mA 53min，
FastBlue蛋白染色液染色30分鐘。