Basta除草劑（10%草銨膦溶液）

● 貯存、運(yùn)輸及效期：

4℃貯存，常溫運(yùn)輸，有效期兩年。

● 產(chǎn)品介紹：

草銨膦，英文名稱(chēng)：glufosinate-ammonium；phosphinothricin；PPT。中文別名：DL-膦絲菌素，草丁膦。商品名：Basta；Buster。CAS號(hào)：77182-82-2，分子式：C₅H₁₅N₂O₄P，分子量：198.16。固體為白色結(jié)晶，有輕微氣味，熔點(diǎn)215℃，蒸氣壓<0.1 MPa(20℃)，在一般有機(jī)溶劑中溶解度低，對(duì)光穩(wěn)定。

谷氨酰胺合成酶（glutamine synthetase ，GS）在植物的氮代謝過(guò)程中一個(gè)重要的解毒酶，可解除由硝酸鹽還原、氨基酸降解及光呼吸中釋放出的銨的毒性。草銨膦的靶標(biāo)酶是谷氨酰胺合成酶（GS）。正常情況下，GS可以由ATP及glutamate形成λ-glutamyl phosphate。但是在草銨膦處理后，草銨膦先與ATP結(jié)合，磷酸化的草銨膦占據(jù)GS分子的8個(gè)反應(yīng)中心，使GS的空間構(gòu)型發(fā)生變化，抑制GS活性。植物葉片內(nèi)的GS有2種形式，GS1存在細(xì)胞質(zhì)中，GS2存在葉綠體中，且在不同植物葉片內(nèi)，二者活性比例亦有所不同，但草銨膦能抑制GS所有已知的形式。草銨膦抑制GS的結(jié)果，可以導(dǎo)致植物體內(nèi)氮代謝紊亂，銨的過(guò)量積累，葉綠體解體，從而光合作用受到抑制，最終導(dǎo)致植物死亡。

草銨膦在土壤中的半衰期較長(zhǎng)，半衰期為12-70天，一般情況下為40天。資料顯示草銨膦在pH 5-9的緩沖液中的水解半衰期均大于400天，屬于難水解類(lèi)型。草銨膦在弱酸和弱堿條件下均能穩(wěn)定存在。溫度對(duì)于草銨膦水解的影響明顯，隨溫度升高，降解加快，半衰期大大縮短。從吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）克隆的bar基因（bialaphos resistance gene）被普遍用于轉(zhuǎn)基因作物的報(bào)告基因，該基因編碼膦絲菌素乙酰轉(zhuǎn)移酶（phosphinthricin acetyltransferase，PAT），提供對(duì)于除草劑（草銨膦和雙丙氨膦）的抗性。在培養(yǎng)基中添加20 mg/L（0.002%）以上的草銨膦，存活的組織可以被初步認(rèn)為含有bar基因。

10%Basta即為含量（w/v）10%的草銨膦溶液（0.5 M，100 mg/ml）。用于植物抗性篩選，用前使用去離子水稀釋?zhuān)Y選植株噴施一般工作濃度為0.001-0.002%（0.05 mM-0.1 mM）。 用于植物組織培養(yǎng)，請(qǐng)用0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌后使用。

 ● 使用方法：

利用Basta篩選轉(zhuǎn)基因植物主要有兩種方法。一種是噴灑篩選：在幼苗長(zhǎng)出葉片之后直接向待篩選植株噴施Basta，另一種是平板篩選：在MS培養(yǎng)基中加入適當(dāng)濃度的 Basta。培養(yǎng)皿中央點(diǎn)野生型種子作為對(duì)照，其余部分點(diǎn)突變體種子，水平放置培養(yǎng)，挑選發(fā)芽較好的幼苗，移栽到土壤中作為候選突變體培養(yǎng)。不同的植物對(duì)于Basta的敏感程度不同，同一植物不同生長(zhǎng)階段對(duì)于Basta 的敏感程度也不同。臨界篩選濃度的判定標(biāo)準(zhǔn)：以野生型幾乎不能發(fā)芽或者發(fā)芽不能存活的basta濃度。

有文獻(xiàn)報(bào)道，以擬南芥為材料，土壤中幼苗篩選草銨膦終濃度為~120 mg/L；培養(yǎng)基中篩選草銨膦終濃度為20-50 mg/L；噴灑篩選草銨膦濃度為10-20 mg/L。參見(jiàn)下表：