SDS-PAGE凝膠快速制備及電泳試劑盒（貨號(hào):RTD6116）
● 產(chǎn)品組成：
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貨號(hào)
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名稱
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規(guī)格
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保存條件
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AC2914-01
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40%PAA(29:1)
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100 ml
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4℃
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TS050-01
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4×Tris/SDS分離膠緩沖液 pH8.8
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100 ml
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4℃
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TS030-01
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4×Tris/SDS濃縮膠緩沖液 pH6.8
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50 ml
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4℃
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AP020P
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APS（干粉）
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0.5 g
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RT
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TA0761-01
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TEMED
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0.5ml
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4℃，避光
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PL080-01
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5×MonoColor蛋白上樣緩沖液（含還原劑）
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1 ml
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-20℃
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TG120P
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5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液（干粉）
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1 L
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RT
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說明書
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一份
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● 產(chǎn)品簡介：
本公司提供的SDS-PAGE蛋白電泳試劑盒包含凝膠制備以及蛋白電泳所需的全部試劑。本試劑盒可配制至少50塊常規(guī)大小的PAGE膠。
● 使用說明：
一 配制分離膠（各試劑使用量請(qǐng)參考表二）
根據(jù)目的蛋白的分子量大小選擇合適的凝膠濃度（表一），再按照下面的分離膠配方表（表二）配制SDS-PAGE的分離膠(即下層膠)。
表一 不同濃度的SDS-PAGE分離膠的最佳分離范圍：
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SDS-PAGE分離膠濃度
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最佳分離范圍
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6%
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50-150kD
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8%
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30-90kD
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10%
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20-80kD
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12%
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12-60kD
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15%
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10-40kD
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配制分離膠前，根據(jù)以下配方準(zhǔn)備10% APS：
10% APS配制-5 ml：將0.5 gAPS干粉溶于5 ml滅菌水中，徹底溶解后分裝，1 ml/支，-20℃?zhèn)浯?，每次取一管使用?0% APS應(yīng)盡量減少室溫存放時(shí)間，以防失效。10%APS在4℃有效期為一周，-20℃有效期6個(gè)月。若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時(shí)間延長，應(yīng)考慮更換使用-20度保存的10%APS。
制備分離膠步驟：
1．參照凝膠模具說明書，裝配好凝膠模具。
2．按照表二將不同體積的成分在小燒杯或試管中混合；加入10%APS和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。
3．在凝膠模具中灌入適量分離膠溶液（對(duì)于mini-gel，凝膠液加至約距前玻璃板頂端1.5 cm或距梳齒約0.5 cm即可），然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-5
cm的水層，使凝膠表面保持平整。
4．靜置30-60分鐘，待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面后，說明凝膠已聚合
表二 SDS-PAGE分離膠配方表
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組份
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不同凝膠體積對(duì)應(yīng)各組份的取樣量（ml）
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6％ 膠 5ml 10ml 15ml 20ml
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H2O
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3
|
6
|
9
|
12
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4×Tris/SDS分離膠buffer
pH8.8
|
1.25
|
2.5
|
3.75
|
5
|
|
40％ PAA（29:1）
|
0.75
|
1.5
|
2.25
|
3
|
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
8％ 膠 5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
2.7
|
5.4
|
8.1
|
10.8
|
|
4×Tris/SDS分離膠buffer
pH8.8
|
1.25
|
2.5
|
3.75
|
5
|
|
40％ PAA（29:1）
|
1
|
2
|
3
|
4
|
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
10％ 膠 5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
2.45
|
4.9
|
7.35
|
9.8
|
|
4×Tris/SDS分離膠buffer
pH8.8
|
1.25
|
2.5
|
3.75
|
5
|
|
40％ PAA（29:1）
|
1.25
|
2.5
|
3.75
|
5
|
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
12％ 膠 5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
2.2
|
4.4
|
6.6
|
8.8
|
|
4×Tris/SDS分離膠buffer
pH8.8
|
1.25
|
2.5
|
3.75
|
5
|
|
40％ PAA（29:1）
|
1.5
|
3
|
4.5
|
6
|
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
|
|
15％ 膠 5ml 10ml 15ml 20ml
|
|
H2O
|
1.825
|
3.65
|
5.475
|
7.3
|
|
4×Tris/SDS分離膠buffer
pH8.8
|
1.25
|
2.5
|
3.75
|
5
|
|
40％ PAA（29:1）
|
1.875
|
3.75
|
5.625
|
7.
|
|
TEMED
|
0.005
|
0.01
|
0.015
|
0.02
|
|
10％ APS
|
0.05
|
0.1
|
0.15
|
0.2
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二 濃縮膠制備：
1．去除覆蓋在分離膠上的水層。
2．按照表三將不同體積成分在一個(gè)小燒杯或試管中混合；加入10%過硫酸銨和TEMED，輕輕攪拌使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡。
3．將濃縮膠溶液加至分離膠的上面，直至凝膠溶液到達(dá)前玻璃板的頂端。
4．將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。
5．靜置30-60分鐘，等待濃縮膠聚合。
表三 SDS-PAGE濃縮膠(4%)配方表
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組份
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不同凝膠體積對(duì)應(yīng)各組份的取樣量（ml）
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2 ml
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4 ml
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5 ml
|
10 ml
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H2O
|
1.3
|
2.6
|
3.25
|
6.5
|
|
4×Tris/SDS濃縮膠buffer pH6.8
|
0.5
|
1
|
1.25
|
2.5
|
|
40％ PAA（29:1）
|
0.2
|
0.4
|
0.5
|
1
|
|
TEMED
|
0.002
|
0.004
|
0.005
|
0.01
|
|
10％ APS
|
0.02
|
0.04
|
0.05
|
0.1
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三 電泳：
凝膠凝固好后，根據(jù)以下配方準(zhǔn)備電泳緩沖液。
5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液的配制-1 L：將一包5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液干粉全部倒入1L燒杯中，加入約900 ml水徹底溶解，用水定容至1 L，即配成5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液（此溶液不用調(diào)節(jié)pH值）。用前再稀釋5倍即配成1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液。
在電泳槽的內(nèi)槽內(nèi)加入1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔)，輕輕的撥出梳子，隨后在電泳槽外槽加入適量的1×Tris-甘氨酸電泳緩沖液。上樣，電泳，一般是濃縮膠80V，分離膠120V恒壓，等指示前沿溴酚蘭電泳到分離膠下緣后，結(jié)束電泳，染色或者進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。
下一步實(shí)驗(yàn)。
引用RTD6116 SDS-PAGE凝膠快速制備及電泳試劑盒發(fā)表文章
1. [2015 IF=1.15] Metal-Chelate
Affinity Precipitation with Thermo-Responsive Polymer for Purification of
ε-Poly-L-Lysine.
Product: RTD61116
SDS-PAGE凝膠快速制備及電泳試劑盒
Author: Sipeng Li, Zhaoyang
Ding, Jifu Liu, Xuejun Cao
Journal: Appl
Biochem Biotechnol. 183, 4, 1254-1264,2017
Institution：Department of Bioengineering, East China University
of Science and Technology
Paper link：https://link.springer.com/article/10.1007/s12010-017-2495-3
2. [2013 IF=5.48] Rapid
Allergen Inactivation Using Atmospheric Pressure Cold Plasma.
Product: RTD61116
SDS-PAGE凝膠快速制備及電泳試劑盒
Author: Yan
Wu,Yongdong Liang,Kai Wei,Wei Li,Maosheng Yao,Jue Zhang
Journal: Environmental
Science & Technology 48 (5), 2901–2909，2014
Institution： Peking
University
Paper
link：https://www.pubs.acs.org/doi/pdf/10.1021/es5003988
3. [2013 IF=3.95] MS2
Virus Inactivation by Atmospheric Pressure Cold Plasma Using Different Gas
Carriers and Power Levels.
Product: RTD61116
SDS-PAGE凝膠快速制備及電泳試劑盒
Author: Yan
Wu1, Yongdong Liang2, Kai Wei, Wei Li, Maosheng Yao, Jue Zhang, Sergey A.
Grinshpun.
Journal: Appl.
Environ. Microbiol 2015 Feb;81(3):996-1002
Institution：Peking University
Paper
link：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25416775/