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非變性蛋白電泳Marker轉(zhuǎn)膜問(wèn)題
http://pipe-shield.com/news_detail.aspx?NewsID=248
非變性電泳蛋白質(zhì)Marker（45-880
kD）
Native
Electrophoresis Protein Marker（45-880 kD）
●產(chǎn)品編號(hào)及規(guī)格：
RTD6137 20次 100
μl
●儲(chǔ)存及運(yùn)輸條件：
-20℃保存，濕冰運(yùn)輸，有效期為12個(gè)月。
● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本產(chǎn)品有4種蛋白組成，分子量范圍為45-880
kD，經(jīng)過(guò)非變性電泳后，用考馬斯亮藍(lán)染色后可以得到5條主帶。
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蛋白名稱
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分子量(kD)
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蛋白來(lái)源
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pI
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說(shuō)明
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Ferritin
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440
880
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equine
spleen
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N/A
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非變性下440kD和880
kD
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Carbonic
Anhydrase
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300
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Bovine
Erythrocytes
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6.4
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單體分子量29kD，非變性下為多聚體，表現(xiàn)為多種電荷異構(gòu)體（charge
isomer）
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Albumin
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66
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bovine
serum
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4.6-5.8
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球蛋白，單體分子量66
kD，非變性下可形成少量二聚體
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Ovalbumin
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45
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egg
white
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4.71或
4.59
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球蛋白，分子量為45kD，非變性條件下大于45kD會(huì)出現(xiàn)電荷異構(gòu)體（charge
isomer）
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● 使用說(shuō)明：
1. 取出產(chǎn)品后，常溫融化后，徹底混勻，上樣電泳。
注：上樣量根據(jù)膠的厚度和梳子的寬度確定。一般說(shuō)來(lái)，1.0厚度10齒梳子加樣孔上樣5 μl，1.0厚度15齒梳子加樣孔上樣量2.5 μl，其他規(guī)格梳子請(qǐng)適當(dāng)調(diào)整上樣量。
2. 該產(chǎn)品不含蛋白凝膠制備試劑，您可以選擇非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒（貨號(hào)：RTD6130）或者蛋白預(yù)制膠（貨號(hào)RTD6118）。如自備試劑，經(jīng)典Laemmli系統(tǒng)中把制膠溶液、電泳緩沖液和上樣緩沖液中的SDS和還原劑（DTT或β-巰基乙醇）全部去除即可進(jìn)行非變性電泳。
3. 電泳條件：
建議使用8%非變性等度膠或者4-15%非變性梯度膠進(jìn)行電泳。
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恒電壓
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150-200 V
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起始電流
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27-35 mA/板膠
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結(jié)束電流
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7-10 mA/板膠
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電泳時(shí)間
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50-80min+
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4. 電泳結(jié)束后，考馬斯亮藍(lán)染色，觀察結(jié)果。
注：使用銀染染色時(shí)，由于靈敏度高于考馬斯亮藍(lán)染色方法，需要適當(dāng)降低Marker上樣量，一般稀釋50倍后上樣。
注意：
1.本蛋白Marker不適用于變性蛋白電泳(SDS-PAGE)。
2. 蛋白非變性電泳條件下，不能精確判斷蛋白的分子量大小。因?yàn)樵诜亲冃詶l件下，蛋白的電荷，空間結(jié)構(gòu)，物化性質(zhì)等都對(duì)蛋白的遷移有影響。
3.非變性蛋白電泳Marker（RTD6137，RTD6142，RTD6144）由于要保持蛋白的天然結(jié)構(gòu)，都沒(méi)有偶聯(lián)染料，在電泳時(shí)基本都看不到條帶；然而，RTD6137和RTD6144中的440 kD和880 kD由于天然蛋白中含有鐵離子，使得電泳后在膠上可見(jiàn)淡黃色，其中440 kD顏色更深。凝膠轉(zhuǎn)膜后，膜上也可以看到黃色的440 kD條帶，可以大體判斷Marker轉(zhuǎn)膜的效果。
4. 非變性Marker轉(zhuǎn)膜后可以后用麗春紅染色液（貨號(hào)：RTD6301）染膜，可以看到Marker條帶，順便可以檢測(cè)轉(zhuǎn)膜效率，然而要注意的是麗春紅染色靈敏度比較低，可能不能完全看到完整的Marker條帶。
● 實(shí)驗(yàn)示例：
使用RTD6137非變性電泳蛋白質(zhì)Marker（45-880
kD）產(chǎn)品發(fā)表部分文章列表：
1.
[2022 IF=8.0] Tektin bundle interacting protein, TEKTIP1,
functions to stabilize the tektin bundle and axoneme in mouse sperm flagella
Author: Xin?Yan Geng,Hui?Juan Jin,
Lan Xia.Bin?Bin Wang,Su?Ren Chen
Marker: RTD6137非變性電泳蛋白質(zhì)Marker（45-880 kD）
Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2024)
81:118
Institution: Beijing
Normal University
Paper link：https://doi.org/10.1007/s00018-023-05081-3