彩虹預(yù)染超低分子量蛋白質(zhì)Marker III（1.5-45 kD）

Rainbow Prestained Ultra Low Molecular Weight Protein Marker III（1.5-45 kD）

●產(chǎn)品編號及規(guī)格：

RTD6147   10 T（50 μl）

● 儲存、運輸及效期：

  -20℃保存，濕冰運輸，有效期1年。

● 產(chǎn)品簡介：

    彩虹預(yù)染超低分子量蛋白質(zhì)Marker III可以直接觀察蛋白電泳及清晰判斷Western Blotting的轉(zhuǎn)膜效果。本產(chǎn)品由7種多肽和蛋白質(zhì)組成，分子量大小為 1.5 kD，4 kD（紅色），8 kD， 15 kD（綠色），20 kD， 30 kD，45 kD (注：蛋白大小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非預(yù)染蛋白Marker標定過。)

● 使用說明：

第一次收到該產(chǎn)品，常溫融化后，徹底混勻，離心快甩將溶液完全收集到管底。

一. 制膠：

說明：可以根據(jù)以下步驟自己制備凝膠。也可以選擇Tris-Tricine-PAGE凝膠制備及電泳試劑盒（貨號：RTD6122）進行實驗。

1.1 配制分離膠

1.1.1 按照表1將組份加入到小燒杯中混合。

1.1.2加入10%APS和TEMED，立即混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。

1.1.3 在玻璃板中迅速灌入適量分離膠溶液，使液面和短玻璃板上沿之間的距離比梳齒長0.5 cm即可（注：此溶液為過量，請勿全部注入）。然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-2 cm的無水乙醇，使凝膠表面保持平整。

1.1.4 靜置15-30分鐘，待分離膠和乙醇層之間出現(xiàn)一個清晰的界面表示凝膠已聚合。

注：凝膠的聚合時間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時，聚合較快；冬天氣溫低時，聚合時間會延長?？梢愿鶕?jù)表1的標準條件調(diào)節(jié)促凝劑的加入量。分離膠25℃條件下，約20分鐘可以聚合。

表1  （一塊1 mm mini膠用量）

1.2 配制濃縮膠

1.2.1 去除覆蓋在分離膠上的乙醇層，用濾紙將殘留乙醇吸去。

1.2.2 按照表1將各組份加入到小燒杯中混合。

1.2.3 加入10%過硫酸銨和TEMED，立即混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。

1.2.4 將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。

1.2.5 靜置30-60分鐘裝待凝膠聚合

注：凝膠的聚合時間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時，聚合較快；冬天氣溫低時，聚合時間會延長?？梢愿鶕?jù)表1的標準條件調(diào)節(jié)促凝劑的加入量。濃縮膠25℃條件下，約40分鐘可以聚合。

二. 電泳：

2.1 取Marker樣品，充分混勻后備用。不要加熱處理。

2.2 電泳前，將10×陽極緩沖液（Cat No：AB080）和10×陰極緩沖液（Cat No：CB010）用蒸餾水稀釋成1×緩沖液備用。將電泳槽的外槽加入1×陽極緩沖液，內(nèi)槽加入1×陰極緩沖液，輕柔拔出梳子，將Marker或蛋白樣品（已經(jīng)過2×Tricine上樣緩沖液[Cat No：TP050]處理）加入點樣孔，參考下表進行電泳，至每條帶都清晰可見時停止電泳。整個電泳過程大約需要2-3個小時。

表2 多肽電泳條件

三. 染色

根據(jù)常規(guī)實驗步驟，用配方6和7（表3）進行染色和觀察。如果使用配方6進行染色時效果不好或考慮其毒性，請選擇本公司的FastBlue蛋白染色液（Cat No：RTD6202），該產(chǎn)品除具有染色快，無毒，靈敏性高等特點外，還能對小肽在染色中起到固定作用，不至于小肽在染色和脫色中從凝膠中脫離，是常規(guī)染色液的理想替代品。

表3 小分子蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳試劑配制