RealPAGE 3-8% Tris-醋酸預(yù)制膠

● 產(chǎn)品組成：

● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Tris-醋酸-SDS-PAGE凝膠電泳適合于分離高分子量蛋白，可以有效分離50-500 kD范圍內(nèi)蛋白；電泳體系呈中性，抑制半胱氨酸的二次氧化，防止二硫鍵在凝膠中交聯(lián)；在變性還原電泳中，電泳緩沖體系中加入抗氧化劑，整個(gè)電泳過(guò)程都在還原條件下進(jìn)行，有效防止二硫鍵的形成。

RealPAGE 3-8% Tris-醋酸預(yù)制膠為梯度凝膠，濃度為3-8%，厚度為1.1 mm，12齒，每個(gè)泳道可以上樣最大30 μl樣品。另外，本公司也提供Tris-醋酸-SDS-PAGE電泳試劑盒（貨號(hào)：RTD6155）包含預(yù)制膠、蛋白上樣、蛋白電泳、染色及轉(zhuǎn)膜所需的全部試劑。

● 貯存及運(yùn)輸：

   按照標(biāo)簽溫度貯存；試劑盒常溫運(yùn)輸。

● 使用說(shuō)明：

1. 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：

1.1 20×樣品還原劑為干粉，4℃貯存。用前加入1ml超純水震蕩徹底溶解后使用，已經(jīng)溶解的20×樣品還原劑-20℃貯存。

1.2 400×抗氧化劑為干粉，常溫貯存。用前加入15 ml超純水震蕩徹底溶解后使用，已經(jīng)溶解的400×抗氧化劑-20℃貯存。

2. 電泳：

注：伯樂(lè)Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列電泳槽請(qǐng)確保密封條的安裝方向（如圖）。

六一其他系列，君意東方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等電泳槽可以直接使用預(yù)制膠。

不兼容Thermol系列電泳槽。

2.2 準(zhǔn)備1×電泳緩沖液：

2.2.1 外槽緩沖液：取適量體積1×電泳緩沖液用于外槽緩沖液。

2.2.2 內(nèi)槽緩沖液：對(duì)于還原樣品電泳，200 ml 1×電泳緩沖液中加0.5 ml 400×抗氧化劑，混合均勻后用于內(nèi)槽緩沖液。對(duì)于非還原樣品電泳，直接在內(nèi)槽中加入1×電泳緩沖液，不要添加400×抗氧化劑。

2.3準(zhǔn)備上樣樣品：

注：表格以配制10 μl樣品為例，其他體積按照比例調(diào)整。

2.4電泳過(guò)程；

在電泳槽的內(nèi)槽內(nèi)加入1×電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過(guò)加樣孔)，輕輕的撥出梳子，用1ml吸頭沖洗加樣孔3次；隨后在電泳槽外槽加入適量的1×電泳緩沖液。上樣，電泳。

3. 染色：

3.1 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中，加入適量FastBlue蛋白染色液（以剛剛覆蓋過(guò)膠面為適），搖床常溫?fù)u動(dòng)，條帶5-10分鐘即可見(jiàn)（蛋白含量高于1 μg條帶）。

3.2 搖床常溫繼續(xù)搖動(dòng)15-30分鐘至條帶清晰可見(jiàn)。

3.3 加入適量蒸餾水脫色，期間更換1-2次蒸餾水，搖床常溫?fù)u動(dòng)10-15分鐘至背景干凈。

3.4 觀察保存結(jié)果。

4. 轉(zhuǎn)膜：

4.1 轉(zhuǎn)印膜選擇：

Tris-醋酸凝膠轉(zhuǎn)膜可以使用NC膜和PVDF膜，需要選擇0.45 μm孔徑。PVDF膜使用前注意需要用甲醇潤(rùn)濕活化。

4.2 10×Tris-醋酸轉(zhuǎn)膜緩沖液（溶液型）配制：

將10×Tris-醋酸轉(zhuǎn)膜緩沖液（濕轉(zhuǎn)，粉末型）粉末溶解于500 ml超純水中，即配成500 ml 10×Tris-醋酸轉(zhuǎn)膜緩沖液（溶液型），不要調(diào)節(jié)pH，pH~7.2。

4.3 準(zhǔn)備1×轉(zhuǎn)膜緩沖液：

注：甲醇和SDS在轉(zhuǎn)膜中有拮抗作用。甲醇使蛋白更加結(jié)合在膜上，而SDS讓蛋白更加離開(kāi)膜。因此對(duì)大蛋白轉(zhuǎn)膜來(lái)說(shuō)，多加SDS，少加甲醇；而對(duì)小蛋白轉(zhuǎn)膜，多加甲醇，少加SDS。

4.4 轉(zhuǎn)膜條件：

以下轉(zhuǎn)膜條件僅供參考，客戶針對(duì)自己的目的蛋白，最好經(jīng)過(guò)1-2次預(yù)實(shí)驗(yàn)后，確定最佳的轉(zhuǎn)膜條件。

實(shí)驗(yàn)示例：