2×Taq plus PCR MasterMix
● 產(chǎn)品包裝:
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目錄號
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包裝
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2×Taq plus MasterMix(不含染料)
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RTS3103-02
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500μl
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RTS3103-03
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5×500μl
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2×Taq plus MasterMix(含染料)
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RTS3104-02
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500μl
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RTS3104-03
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5×500μl
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注:以50μl PCR反應(yīng)體系為例,每次使用25μl 2×MasterMix,500μl可做20次 50μl PCR反應(yīng)。
● 儲存條件: -20℃可長期保存;4℃穩(wěn)定貯存3個月。經(jīng)常使用時,一旦融化后請4℃貯存,盡量避免反復凍融。
● 產(chǎn)品簡介:
本產(chǎn)品包含Taq plus DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)的增強劑和優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑,濃度為2×。使用時,只需補加實驗所需的引物和模板后即可進行PCR反應(yīng),可最大限度的減少人為誤差,具有快速簡便、穩(wěn)定性好等優(yōu)點。適用于常規(guī)PCR反應(yīng)、復雜模板(如GC含量高,有二級結(jié)構(gòu))的擴增以及大規(guī)?;驒z測。使用該產(chǎn)品得到的PCR擴增產(chǎn)物末端含有一個A堿基,可以直接用于TA克隆。
● 質(zhì)量控制:
經(jīng)檢測無外源核酸酶活性;PCR方法檢測無宿主殘余基因組DNA;能有效地擴增人基因組中的單拷貝基因。
● 使用說明:
1. 冰浴中徹底融化2×MasterMix,混勻后Minispin將溶液收集到管底。
2. 按照下表在0.2ml PCR管中制備反應(yīng)體系:
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50μl反應(yīng)體系
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終濃度
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2×MasterMix
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25μl
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1×
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上游引物 10μM
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1-5μl
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0.2-0.8 μM
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下游引物 10μM
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1-5μl
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0.2-0.8 μM
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模板
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× μl
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10pg-1μg
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水
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補至50μl
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3. 快甩離心將反應(yīng)液收集到管底。
4. PCR儀如果沒有熱蓋加熱的話,補加25μl礦物油。
5. PCR儀上執(zhí)行以下程序:
步驟
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溫度
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時間
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循環(huán)數(shù)
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初始變性
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94℃
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5 min
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1
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變性
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94℃
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30 sec
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25-40*
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退火
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Tm-5℃*
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30 sec
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延伸
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72℃
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1 min/kb
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最后延伸
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72℃
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5 min
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1
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*注: PCR 反應(yīng)條件視模板、引物等的結(jié)構(gòu)條件不同而各異。在實際操作中需根據(jù)模板、目的片段的大小、堿基序列和引物的長短等具體情況,設(shè)定最佳的反應(yīng)條件(溫度、時間等)。
6. 電泳檢測。
注:使用含染料的2×MasterMix可以直接上樣;不含染料的2×MasterMix要與6×loading buffer混合后上樣。
實驗示例: