Western及IP細(xì)胞裂解液

● 產(chǎn)品包裝：

● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Western及IP細(xì)胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP)，是一種在非變性條件下裂解細(xì)胞的裂解液。本細(xì)胞裂解液裂解的細(xì)胞，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀(immunol precipitation，IP)和免疫共沉淀(Co-IP)。裂解液的主要成分為20 mM Tris (pH7.5)，150 mM NaCl，1% Triton X-100等，裂解后能維持原有的蛋白間相互作用。由于含有較高濃度的Triton X-100等干擾物質(zhì)，不能用傳統(tǒng)Bradford法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度，可以使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（貨號(hào)：RTP7102）或Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒（去垢劑兼容型）（貨號(hào)：RTP7104）測(cè)定蛋白濃度。

● 保存條件：

-20℃保存，一年有效。

● 注意事項(xiàng)：

1.為取得最佳的使用效果，盡量避免過(guò)多的反復(fù)凍融?？梢赃m當(dāng)分裝后使用。

2. 需自備PMSF或其他蛋白酶抑制劑；如進(jìn)行蛋白磷酸化研究，還需要自備磷酸酶抑制劑。

3. 裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。

● 使用說(shuō)明：

1.  準(zhǔn)備裂解液：

溶解裂解液，混勻；取適當(dāng)量的裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入1/100體積的100 mM PMSF，使PMSF的最終濃度為1 mM。如進(jìn)行蛋白磷酸化研究，需要加入磷酸酶抑制劑。

2. 細(xì)胞蛋白提取：

2.1 貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，加入適量1×PBS，輕柔漂洗一遍，不要擾動(dòng)貼壁細(xì)胞。按照6孔板每孔加入100-200 μl裂解液的比例加入裂解液，移液器吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸，冰上裂解細(xì)胞5分鐘，用細(xì)胞刮刀刮下細(xì)胞收集于1.5 ml離心管中，冰上繼續(xù)裂解15分鐘，間歇混勻。

2.2 懸浮細(xì)胞：450 g 4℃ 離心5 min收集細(xì)胞；用適量1×PBS重懸細(xì)胞，450 g 4℃ 離心5 min收集細(xì)胞；重復(fù)漂洗細(xì)胞一次；按照細(xì)胞沉淀體積（PCV）20 μl加入200 μl 裂解液，混勻細(xì)胞沉淀，冰浴處理15分鐘，間歇混勻。

注：2×10⁶ Jurkat細(xì)胞，其細(xì)胞沉淀體積（PCV，Packed Cell Volume）大約為20 μl。

2.3 裂解細(xì)胞：

用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解或通過(guò)強(qiáng)烈渦旋震蕩使樣品裂解充分。冰浴處理15分鐘。

注：裂解混合物不建議使用超聲波破碎儀處理，因?yàn)槌暡ㄌ幚肀容^劇烈，容易破壞蛋白的相互作用導(dǎo)致蛋白變性。

2.4 離心收集上清：

充分裂解后，4℃ 16000 g離心10分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

3. 組織樣品蛋白提?。?/b>