Western無蛋白快速封閉液

Protein Free Rapid Blocking Buffer for WB

● 產品組成：

● 產品簡介：

本產品專為快速高效封閉Western Blot 轉印膜而設計，采用無蛋白配方，避免抗體與封閉劑的非特異結合，最大程度地降低了背景。同時，本封閉劑無內源的磷酸化蛋白及生物素，對磷酸化特異抗體及生物素檢測也不會產生干擾。本封閉劑不與蛋白產生非特異性結合，因而只封閉膜而不會屏蔽樣品蛋白的抗體識別位點，大大提高了抗體檢測靈敏度。實驗表明，本封閉劑對許多抗體都有不同程度的信號增強作用。然而這種信號增強作用因抗體而異，對某一特定抗體，并不一定具有確定的信號增強作用。

注意： 沒有任何一種封閉劑能適合所有抗原和抗體的檢測系統(tǒng)。如出現(xiàn)本試劑不適合的抗體，請?zhí)鎿Q使用其它種類的封閉劑如BSA或脫脂奶粉等。

● 貯存：

  2-8℃貯存，有效期一年。

● 注意事項：

1. 快速高效：10-60 min內完成封閉；只結合封閉轉印膜而不結合蛋白，因此不會屏蔽樣品蛋白的抗體識別位點，與傳統(tǒng)的脫脂奶粉和BSA 封閉相比信噪比更高；

2. 方便快捷：無需稀釋，即取即用；

3. 性能可靠：無蛋白配方，與抗體無交叉反應；

4. 應用范圍廣：無磷酸化蛋白，無生物素，尤其適合磷酸化特異抗體及生物素檢測系統(tǒng)；

5. 節(jié)省抗體：使用本封閉劑后，所需的最適抗體濃度低于常規(guī)使用濃度，可大大節(jié)省抗體使用量。

6. 與PVDF膜相比，NC膜需要更長時間的封閉。

● 使用說明：

1. 本產品無需稀釋，開蓋即用。

2. 完成轉膜后，使用TBST漂洗轉印膜3次，每次5分鐘；

3. 將轉印膜放入到雜交孵育盒中，加入10-20 ml 無蛋白快速封閉液完全覆蓋轉印膜，置于搖床輕輕搖動，參考下表確定封閉時間：

注意：使用本產品，PVDF膜和NC膜使用推薦封閉時間，經多種抗體的測試封閉效果顯著優(yōu)于常規(guī)的BSA封閉1 h。對于一些背景非常高的抗體，可以嘗試延長封閉時間。如有特殊需要，也可4℃封閉過夜。

● 實驗示例：

Jurkat細胞總蛋白GAPDH檢測

電泳條件：200 V 1×TGS 40-12 mA 53 min

轉膜條件：NC膜，1×RealBlot快速轉膜液(Cat:RT5020)

植物葉綠體LHCa3檢測

Electrophoresis: 10% RealPAGE SDS Electrophorosis(RTD6148)

Transfer: 1×RealBlot transfer buffer(Cat:RT5020)

               350 mA blotting to NC membrane for 30 min.

Blocking: 無蛋白封閉液（Cat:PF1070） RT  for 20 min;

BSA at RT for 1 h.

Primary antibody: Lhca3（Cat:RGL2080） 1:2000 dilution at RT for 1h

Secondary antibody: 1:5000 dilution using Goat Anti-Rabbit IgG AP(Cat:AGR1030)

                Detection: using BCIP/NBT(Cat:BN1026) at RT for 5 min